一、潔凈室（區）的概念

美國航空業(yè)的陀螺儀制造過(guò)程中最先提出了生產(chǎn)環(huán)境的潔凈要求，為消除空氣中的塵埃粒子對航空儀器的齒輪、軸承的污染。降低返工率，提高使用壽命。

1.潔凈區定義：

2.潔凈區的分類(lèi)：

按照氣流流型，可分為單向流潔凈室和非單向流潔凈室。

單向流潔凈室

非單向流潔凈室

3.適用的產(chǎn)品：

1.適用于通過(guò)最終滅菌方法、通過(guò)無(wú)菌加工技術(shù)使產(chǎn)品無(wú)任何存活微生物的醫療器械及體外診斷試劑產(chǎn)品的生產(chǎn)，如血管內支架、骨科植入物等。

2.適用于需要控制初始污染菌的醫療器械品種，如透析液（粉）等。

3.與產(chǎn)品直接接觸的單包裝。

4.構成：

生產(chǎn)用房：與生產(chǎn)產(chǎn)品工藝流程相對應的功能間，如注塑間、干燥間等。

檢驗用房：與檢驗有關(guān)的功能間，如陽(yáng)性對照間、無(wú)菌檢驗間、微生物限度間等。

輔助功能用房：為生產(chǎn)服務(wù)的輔助功能間，如洗衣間、潔具間、鏈接各功能間的緩沖過(guò)濾通道。

二、潔凈室（區）檢測標準

引用英制單位（100級、10 000級、100 000級、300 000級）的標準有：

GB 50457-2008《醫藥工業(yè)潔凈廠(chǎng)房設計規范》

GB/T 16292-2010《醫藥工業(yè)潔凈室(區)懸浮粒子的測試方法》

GB/T 16293-2010《醫藥工業(yè)潔凈室(區)浮游菌的測試方法》

GB/T 16294-2010《醫藥工業(yè)潔凈室(區)沉降菌的測試方法》

YY 0033-2000《無(wú)菌醫療器具生產(chǎn)管理規范》等

引用ISO單位（1~9級）的標準有：

GB 50073-2013《潔凈廠(chǎng)房設計規范》

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》等

無(wú)菌醫療器具潔凈室（區）環(huán)境要求及監測一般參照下表進(jìn)行

檢測方向：

三、潔凈室（區）的驗證

1.溫度

潔凈區空調系統不僅有多層凈化空氣的作用，還具有調節系統溫度的能力。微生物在溫度、濕度等條件適宜的情況下會(huì )不斷地生長(cháng)和繁殖。

要求：無(wú)特殊要求時(shí)（18~28）℃。

方法標準：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》

檢測點(diǎn)為房間中心一點(diǎn)，應在溫度讀數穩定后再記錄。

2.濕度

保持潔凈區空氣適宜的濕度不僅能夠保證工作人員的 舒適度，更能控制微生物的存活率，保證產(chǎn)品質(zhì)量。

要求：（45～65）%

注意：

某些生產(chǎn)車(chē)間會(huì )根據產(chǎn)品特殊的生產(chǎn)工藝，對濕度有特殊的要求。例如某些IVD的一些特殊生產(chǎn)工藝環(huán)節要求空氣濕度盡量干燥，達到30%以下。

方法標準：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》

測量?jì)x器的選擇：

溫濕度測量?jì)x。其中濕度測量的量程（1～100）%， 分辨率0.1%，測量不確定度±2.5%。

3.氣流組織形式與換氣次數#p#分頁(yè)標題#e#

氣流組織：是指對氣流流向和均勻度按一定要求進(jìn)行組織的空氣流動(dòng)狀態(tài)與分布。

單向流（百級）：沿單一方向呈平行流線(xiàn)并且與氣流方向垂直的斷面上風(fēng)速均勻的氣流。

非單向流（亂流）：其原理是靠潔凈送風(fēng)氣流擴散、混合、不斷稀釋室內空氣，把室內污染逐漸排出，達到平衡。

潔凈室內各項指標的維持和調節都是通過(guò)換氣來(lái)完成的，換氣性能與其他所有項目都聯(lián)系緊密。合理的換氣次數、風(fēng)速、氣流組織形式是保證潔凈室性能的前提條件。

方法標準：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》

對于單向流潔凈室，可采用截面平均風(fēng)速和截面積乘積的方法確定送 風(fēng)量。

垂直單向流潔凈室的測定截面取距地面0.8m的無(wú)阻隔面（孔板、格柵除外）的水平截面，如有阻隔面，該測定截面應抬高至阻隔面之 上0.25m；

水平單向流潔凈室取距送風(fēng)面0.5m的垂直于地面的截面；

截面上測點(diǎn)間距應不大于1m，一般取0.3m，測點(diǎn)數應不少于20個(gè)，均勻布置。

換氣次數的計算方法：換氣次數（次/h）= 風(fēng)速（m/s）x 送風(fēng)口面積（㎡）x 3600/ 房間體積（m）。

對于非單向流潔凈室，可采取風(fēng)量罩法測量送風(fēng)量并計算換氣次數。

換氣次數（次/h）= 房間送風(fēng)量（m/h） / 房間體積（m）

4.靜壓差

保持合理的靜壓差是保證潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境抵抗外界污染、防止內部污染和交叉污染的重要措施。穩定的壓差是保證潔凈室潔凈度等級的重要條件。

要求：

不同級別潔凈室及潔凈室與非潔凈室之間≥5Pa；潔凈室與室外大氣≥10Pa。

方法標準：

JGJ 71-1990；

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》

5.潔凈度

影響潔凈度的因素眾多，可以分為內在因素和外在因素。內在因素包括 換氣次數、壓差、高效過(guò)濾器檢漏、潔凈區的密封性。外在因素包括人員、物品進(jìn)出環(huán)境帶來(lái)的塵埃粒子影響和潔凈區日常清潔頻率。

方法標準：

GB 50591-2010《潔凈室施工及驗收規范》

測量?jì)x器：

粒子計數器

采樣量：2.83L/min或28.3L/min。

粒徑：0.3μm、0.5μm、1.0μm、3.0μm、5.0μm、10.0μm。

測試要點(diǎn)：

1. 必須按照測試儀器的檢定周期，定期對測試儀器作檢定。應使用檢定合格，且在使用有效期內的儀器。

2. 測試儀器在未進(jìn)入被測區域時(shí)，若必需，則先清潔表面，或在相應的潔 凈室內準備和存放（用保護罩或其它適當地外罩保護儀器）。

3. 在100級潔凈室內用紙時(shí)，上面應蒙上一張透明不沾塵的覆蓋物，在100 級潔凈室內不能用鉛筆和橡皮。

4. 使用測試儀器時(shí)應嚴格按照儀器說(shuō)明書(shū)操作。

4.1 儀器開(kāi)機，預熱至穩定后，方可按測試儀器說(shuō)明書(shū)的規定對儀器進(jìn)行校正，同時(shí)檢查采樣流量和等動(dòng)力采樣頭。#p#分頁(yè)標題#e#

4.2 采樣管口置于采樣點(diǎn)采樣時(shí)，在計數趨于穩定后，開(kāi)始連續讀數。

4.3 采樣管必須干凈，嚴禁滲漏。

4.4 采樣管的長(cháng)度應根據儀器的允許長(cháng)度。除另有規定外，長(cháng)度不得大于1.5m。

4.5 粒子計數器采樣口和儀器工作位置宜處在同一氣壓和溫度下，以免產(chǎn)生測量偏差。

最少采樣點(diǎn)數目：

懸浮粒子測試最少采樣點(diǎn)數目可在以下兩種方法中任選一種：

① NL= √A

式中：NL — 最少采樣點(diǎn)；

√A — 潔凈室或潔凈區的面積，單位為平方米（m2）。

注：在單向流情況下，面積A可以認為是垂直于氣流方向上的橫截面積。

② 最少采樣點(diǎn)數目可從下表查到。

采樣點(diǎn)分布：

潔凈室采樣點(diǎn)的分布應均勻，避免在局部區域過(guò)于稀疏。在動(dòng)態(tài)測試時(shí)，懸浮粒子采樣點(diǎn)的分布應根據產(chǎn)品的生產(chǎn)及工藝關(guān)鍵操作區域設置。

下列多點(diǎn)采樣的采樣點(diǎn)布置圖示可作參考：

采樣點(diǎn)的位置應滿(mǎn)足一下要求：

1.采樣點(diǎn)一般在離地0.8m高度的水平面上均勻布置。

2.采樣點(diǎn)多于5個(gè)時(shí)，也可以在離地面0.8~1.5m高度的區域內分層布置，但每層不少于5點(diǎn)。

采樣次數的限定：

對于任何潔凈室或局部空氣凈化區域，采樣點(diǎn)的數目不得少于2個(gè)，總采樣次數不得少于5次。每個(gè)采樣點(diǎn)的采樣次數可以多于1次，且不同采樣點(diǎn)的采樣次數可以不同。

最小采樣量：

采樣注意事項：

① 對于單向流潔凈室（區），粒子計數器的采樣管口應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區），粒子計數 器的采樣管口宜向上。

② 布置采樣點(diǎn)時(shí)，應盡量避開(kāi)回風(fēng)口。

③ 采樣時(shí)，測試人員應在采樣口的下風(fēng)側，并盡量少活動(dòng)。

④ 采樣完畢后，宜對粒子計數器進(jìn)行自?xún)簟?/p>

⑤ 應采取一切措施防止采樣過(guò)程的污染。

結果計算：

懸浮粒子濃度的報出結果必須按照GB/T 16292-1996《醫藥工業(yè)潔凈室（區）懸浮粒子的測試方法》中的要求進(jìn)行計算。報出值應為95%置信上限。

結果評定：

判斷懸浮粒子潔凈度級別應依據下述的兩個(gè)條件：

1.每個(gè)采樣點(diǎn)的平均粒子濃度必須不大于規定的級別界限。

2.全部采樣點(diǎn)的粒子濃度平均值的95%置信上限必須不大于規定的級別界限。

6.沉降菌

通過(guò)自然沉降收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿，經(jīng)若干時(shí)間，在適 宜的條件下讓其繁殖到可見(jiàn)的菌落進(jìn)行計數，以平板培養基上的菌落數來(lái) 判定潔凈環(huán)境內的活微生物數，并以此來(lái)判斷潔凈室（區）的微生物濃度。

方法標準：

GB/T 16294-1996《醫藥工業(yè)潔凈室（區）沉降菌的測試方法》

培養皿：

一般采用90mm×15mm規格的培養皿培養基：NA、TSA、SDA、其他經(jīng)驗證的培養基生化培養箱：控溫范圍：(0～60)℃并定期對培養箱進(jìn)行溫度的校準。#p#分頁(yè)標題#e#

最少采樣點(diǎn)數目：

沉降菌測試最少采樣點(diǎn)數目可在以下兩種方法中任選一種：

① NL= √A

式中：NL — 最少采樣點(diǎn)；

√A — 潔凈室或潔凈區的面積，單位為平方米（m2）。

②查表

沉降菌的采樣點(diǎn)位置同懸浮粒子的布點(diǎn)。

測試步驟：

① 測試前培養皿表面必須嚴格消毒。

② 將已制備好的培養皿按采樣點(diǎn)布置圖逐個(gè)放置，然后從里到外逐個(gè)打開(kāi)培養皿蓋，使培養基表面暴露在空氣中。

③ 靜態(tài)測試時(shí)，培養皿暴露時(shí)間為30min以上；動(dòng)態(tài)測試時(shí)， 培養皿暴露時(shí)間為不大于4h。

④ 全部采樣結束后，將培養皿放置于(30～35)℃培養箱中培養至少48小時(shí)。

⑤ 每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。

可每批選定3只培養皿作對照培養。

菌落計數：

① 用肉眼對培養皿上所有的菌落直接計數、標記或在菌落計數器上點(diǎn)計，然后用5～10倍放大鏡檢查是否遺漏。

② 若平板上有2個(gè)或2個(gè)以上的菌落重疊，可分辨時(shí)仍以2個(gè)或2個(gè)以上菌落計數。

注意：

① 采樣前應仔細檢查每個(gè)培養皿的質(zhì)量，如發(fā)現變質(zhì)、破損或污染的應剔除。

② 由于細菌種類(lèi)繁多差別較大，計數時(shí)一般在背面透射光下觀(guān)察。注意不要漏計培養皿邊緣生長(cháng)的菌落，并須注意菌落與培養基沉淀物的區別， 必要時(shí)用顯微鏡鑒別。

最少培養皿數：

在滿(mǎn)足最少采樣點(diǎn)數目的同時(shí)，還應滿(mǎn)足最少培養皿數，見(jiàn)下表：

采樣時(shí)注意事項：

① 布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應盡量避開(kāi)塵粒較集中的回風(fēng)口。

② 采樣時(shí)，測試人員應站在采樣口的下風(fēng)側，并盡量少走動(dòng)。

③ 應采取一切措施防止采樣過(guò)程的污染和其他可能對樣本的污染。

④ 培養皿在用于檢驗時(shí)，為避免培養皿運輸或搬動(dòng)過(guò)程造成的影響，宜同時(shí)進(jìn)行對照試驗，每次或每個(gè)區域取一個(gè)對照 皿，與采樣皿同法操作但不需暴露采樣，然后與采樣后的培養 皿一起放入培養箱內培養，結果應無(wú)菌落生長(cháng)。

⑤ 對培養基、培養條件及其他參數作詳細的記錄。

計算結果：

7.浮游菌

浮游菌的測試條件、狀態(tài)、最少采樣點(diǎn)數目、采樣點(diǎn)布點(diǎn)、菌落計數與沉降菌相同。

測試步驟：

1. 測試前儀器、培養皿表面必須嚴格消毒。

2. 采樣器進(jìn)入被測房間前先用消毒房間的消毒劑滅菌，用 于100級潔凈室的采樣機宜預先放在被測房間內。

3. 用消毒劑擦凈培養皿的外表面。

4. 采樣前，先用消毒劑清洗采樣器的頂蓋、轉盤(pán)以及罩子 的內外面，采樣結束，再用消毒劑輕輕噴射罩子的內壁和轉 盤(pán)。

5. 采樣口及采樣管，使用前必須高溫滅菌。如用消毒劑對 采樣管的外壁及內壁進(jìn)行消毒時(shí)，應將管中的殘留液倒掉并 晾干。#p#分頁(yè)標題#e#

6.采樣者應穿戴與被測潔凈區域相應的工作服，在轉盤(pán)上 放入或調換培養皿前，雙手用消毒劑消毒或戴無(wú)菌手套操作。

7. 采樣儀器經(jīng)消毒后先不放入培養皿，開(kāi)啟浮游菌采樣器， 使儀器中的殘余消毒劑蒸發(fā)，時(shí)間不少于5min，并檢查流量 并根據采樣量調整設定采樣時(shí)間。

8.關(guān)閉浮游菌采樣器，放入培養皿，蓋上蓋子。

9. 置采樣口于采樣點(diǎn)后，開(kāi)啟浮游菌采樣器進(jìn)行采樣。

10.全部采樣結束后，將培養皿倒置于30℃～35℃培養箱 中培養不少于48小時(shí)。

11. 每批培養基應有對照試驗，檢驗培養基本身是否污染。 可每批選定3只培養皿作對照培養。

最小采樣量：

注意事項：

① 對于單向流潔凈室（區）或送風(fēng)口，采樣器采樣口朝向應正對氣流方向；對于非單向流潔凈室（區），采樣口向上。

② 布置采樣點(diǎn)時(shí)，至少應盡量避開(kāi)塵粒較集中的回風(fēng)口。

③ 采樣時(shí)，測試人員應站在采樣口的下風(fēng)側，并盡量少走動(dòng)。

④ 應采取一切措施防止采樣過(guò)程的污染和其他可能對樣本的污染。

⑤ 培養皿在用于檢驗時(shí)，為避免培養皿運輸或搬動(dòng)過(guò)程造成的影響，宜同時(shí)進(jìn)行對照試驗，每次或每個(gè)區域取一個(gè)對照皿，與采樣皿同法操作但不 需暴露采用，然后與采樣后的培養皿一起放入培養箱內培養，結果應無(wú)菌落生長(cháng)。

結果判定：

① 每個(gè)測點(diǎn)的浮游菌平均濃度必須低于所選定評定標準中的界限。

② 在靜態(tài)測試時(shí)，若某測點(diǎn)的浮游菌平均濃度超過(guò)評定標準，則應重新采樣兩次，兩次測試結果均合 格才能判為符合。

8.照度

主要工作室一般照明的照度值為300lx。

輔助工作室的照度宜不低于150lx。

對照度有特殊需求的生產(chǎn)部位可設置局部照明。

9.噪聲

潔凈室內額空態(tài)噪聲級，非單向流潔凈室不應大于60dB，單向流、混合流潔凈室不應大于65dB。